蜂蜜中果糖、葡萄糖含量测定方法的改进

(广东省江门市质量计量监督检测所, 广东 江门 529000)

摘  要：目前，我国对蜂蜜中果糖、葡萄糖含量的方法其中大部分操作都用到剧毒的乙腈。本文采用超纯水代替整个实验过程中所有用到的乙腈，液相色谱视差折光检测器。线性好，果糖和葡萄糖相关系数为0.9996、0.9993，加标回收率为92.00%~101.00%，93.00%~100.50%。试验操作可行，危害性降为零，成本大大降低。

关键词：蜂蜜；果糖；葡萄糖；超纯水；高效液相色谱

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜，分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质[1]。

中国蜂蜜出口的现状我国每年出口蜂蜜数量占世界出口总量的20％左右，年均创汇1亿美元，蜂群数量和主要蜂产品出口均居世界第一。但是养蜂业目前还是手工作坊式，从生产到流通处在无序状态，与蜂产品大国的地位不相适应。由于市场混乱，不能实行优质优价，蜂农频繁采集不成熟蜜，致使蜂蜜浓度达不到标准[2]。

蜂蜜含有多种糖，主要是果糖和葡萄糖，果糖和葡萄糖是蜂蜜的主要甜味成分和重要质量特性指标。蜜蜂采集的花蜜、蜜露或甘露，蜜蜂并不是简单地直接利用，而是有一个加工酿造过程，才能变为成熟的蜂蜜。果糖和葡萄糖含量（还原糖）指标偏低，说明了蜂农为了产量，急于求成，缩短了蜂蜜加工酿造过程，现在也有些蜂农在花季淡季的情况下，直接给蜜蜂喂蔗糖，增加产量。该指标偏低表明蜜蜂未经充分酿造或在蜂蜜中掺入了糖类物质。因此，如何寻求便捷的方法提高其检测效率有着重要的意义。 

随食品安全问题泛滥，企业增设了产品的检测程序。目前检测蜂蜜的国家的标准是GB/T18932.22-2003。其中无论是样品的制备，标准溶液的流动相制备，全部都用到有毒的乙腈。乙腈，极易挥发，有刺激性而且易燃；对人体伤害及潜在危害也是巨大的。并且成本高，对于条件较简陋的检测基层或是小型企业该方法能更好的开展质检工作，除减少对身体的危害和节约成本，也减少对环境的污染。

1  材料与方法

1.1 仪器

Waters E2965（ 美国WATERS公司）；Waters 2414示差折光检测器（ 美国WATERS公司）；色谱柱：1. Carbohydrate high performance（4.6×250mm），2. RezexROA-Organic Acid H+（8%）（7.8×150mm）；Minipore synergy超纯水机；超声波清洗机；分析天平（0.0001g）。

1.2 试剂

果糖，葡萄糖的标准物质（纯度≥99%）；乙腈（色谱纯）。所有试剂均为市售，未作进一步纯化处理；蒸馏水，超纯水为实验室自制。

1.3 试样和标准溶液制备

Carbohydrate high performance：将样品搅拌均匀，取0.1g、0.5g、2g、5g试样，精确至0.0001g于100mL烧杯中，加30mL水，用玻棒搅拌使试样完全溶解。转移到100mL容量瓶中。然后用10mL水洗烧杯三次并转移至上述100mL容量瓶中，用乙腈定容至体程，混匀。用0.45μm滤膜将样液过滤如样品瓶中供液相色谱测定。标准用液：用乙腈+水（40+60）稀释至体积，配成不同浓度的果糖，葡萄糖的工作溶液[3]。

RezexROA-Organic Acid H+（8%）：将样品搅拌均匀，取0.1g、0.5g、2g、5g试样，用超纯水溶解，超声，定容至刻度。用0.45μm滤膜过滤。上机测定。标准溶液也是用超纯水配制。

1.4 根据样品特性和仪器，色谱柱各自的特点与性能，调至最佳状态。表1

表1 液相色谱最佳工作状态

 2  结果与讨论

 2.1  标准物质色谱图

在相同的色谱条件下，用carbohydrate high performance（4.6×250mm）；RezexROA-Organic Acid H+（8%）（7.8×150mm）测定果糖、葡萄糖2g/100g标准溶液，结果如图1、2所示。

实验证明使用超纯水作为流动相效果让人满意.。

2.2 工作曲线

称取1g标准样品用超纯水溶解定容至100mL，配制成1g/100mL的标准溶液，然后逐级稀释配制成标准系列溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5g/100mL，果糖和葡萄糖各自的相关系数为0.9996、0.9993。

2.3 测定数据（随机选取其中7个样品）

在选择最佳条件测试下，对样品进行测验及结果统计分析。试验结果见表2、3。

表2 不同样品中果糖，葡萄糖的含量

   表3 蜂蜜中果糖、葡萄糖含量测定结果统计分析

其相对标准偏差小于0.05，所以方法是可行的。

2.4 回收率及精密度

2.4.1 回收率

通过蜂蜜的加标实验来验证该方案的可行性，在加标浓度分别为0.1 g/100g，0.2 g/100g，0.5 g/100g时，均获得了较理想的回收率。试验结果见表4、5。

表4 蜂蜜中葡萄糖加标实验数据

表5 蜂蜜中果糖加标实验数据

通过以上试验表明，加标回收率为92.00%~101.00%，93.00%~100.50%。此法测定果糖，葡萄糖的结果比较满意。

2.4.2 精密度

分别取2 g/100g的果糖，葡萄糖标准溶液测定6次，在此浓度下测定结果的相对标准偏差均小于1%，即本方法的重现性良好。试验结果见表6。

表6 测定结果精密度

3 结论

本文主要是通过用超纯水作为流动相来测定蜂蜜中果糖和葡萄糖的含量。其加标回收率在92.00%~101.00%，93.00%~100.50%的范围。超纯水作为流动相比乙腈溶液成分单一，高效液相色谱仪的各个参数短时间能进入使用状态。通过上述试验表明，用超纯水作为流动相的高效液相色谱法检测结果的精密度，准确度等符合其含量分析要求。本方法操作简单快速，重复性好，灵敏度高，准确性好，回收率高，结果稳定可靠。减轻了操作者的劳动强度，身体危害和节约企业成本。这种用超纯水代替对人对环境有害的乙腈作为流动相是可行的。上述方法能代替国标中用乙腈作为流动相的方法。

参考文献

[1] 国家质量监督检验检疫总局发布.中华人民共和国蜂蜜（honey）（CAC Codex Stan 12-1981，Rev.2(2001)Honey,NEQ）

[2] 惠兴惠.中国蜂蜜出口问题分析.[J].中国蜂业，2010（10）：50-52

[3] GB/T22221-2008 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 高效液相色谱法

[4] GB/T18932.22-2003 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法    相色谱示差折光检测法

[5] 于世林.高效液相色谱方法及应用[M].北京：化学工业出版社，2005

来源：化学工程与装备-官方网站-创刊于1972    2022年第4期  在线投稿  >>